博来霉素法构建肺纤维化动物模型？

【造模方法】

小鼠：选用体重18～20g的雄性昆明小鼠。氯胺酮(100mg/2ml)腹腔注射(10mg/100g)，将实验动物麻醉后仰卧，纵行切开皮肤，钝性分离暴露气管，用4号针头刺入气管，尽量接近气管分叉处，将0.05ml博来霉素缓慢滴入(博来霉素每支8mg，用前以生理盐水配制成0.2％药液)，立即将动物直立旋转，使药液在肺内均匀分布，然后缝合皮肤，局部乙醇消毒防止感染。同样，也可选用雌性BLAB/C鼠，将小鼠腹腔注射水合氯醛麻醉后固定于操作台，以动物喉镜压下小鼠舌根暴露声门，雾化器从声门插入气管并雾化注入博来霉素溶液100μl(5mg/kg)。

【模型特点】小鼠使用博来霉素后15天，病变弥漫，但以肺泡间隔、血管和小气管周围显著。病变处肺泡壁增厚，毛细血管扩张，肺泡腔变小，其中充满大量的中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等炎症细胞。在气管、血管周围及近胸膜处出现以中性粒细胞、单核细胞为主的炎症细胞浸润，呈3级肺泡炎性改变。30天后病变弥漫，病变处肺泡壁增厚，肺泡间隔增宽。在气管和血管周围及近胸膜处肺组织可见以单核细胞和淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，胸膜增厚，并可见较明显的成纤维细胞和胶原纤维的增生和集聚。主要呈1级纤维化改变。

经典的复制肺纤维化小鼠模型方法是气管内滴入博来霉素溶液。气管内滴入或雾化博来霉素均能引起明显的肺组织损伤与肺纤维化改变。单次气管内滴入博来霉素即可引起明显的肺纤维化，但病灶分布欠均匀，不能准确地模拟人类原发性肺纤维化病变的弥漫性分布。气管内雾化给药方式能使博来霉素更均匀地分布于肺内，纤维化改变更弥散，更接近人类肺纤维化改变。气管内雾化博来霉素溶液不需穿刺气管，减少了动物的损伤与痛苦，可作为复制肺纤维化小鼠模型的优选方案。

博来霉素法（Bleomycin）可以用于构建肺纤维化动物模型，常用于小鼠和大鼠模型的制备。

制备模型的方法一般是将博来霉素通过气管直接喷入动物的肺部，使其诱导肺组织发生纤维化变化。具体操作步骤如下：

将博来霉素溶解于生理盐水或者PBS中，制备成一定浓度的药液。

使用麻醉剂使小鼠或大鼠进入昏迷状态，然后将药液通过气管插管注入动物的肺部。

使动物保持直立姿势，以便药物充分接触肺组织表面。

麻醉剂逐渐消退后，将动物恢复到正常状态，维持其日常生活和饮食。

在一定时间后（通常为1-4周），通过解剖或者其他方式采集肺组织样本，进行病理学和分子学的检测。

需要注意的是，博来霉素是一种强烈的致纤维化剂，其使用需要谨慎，应该严格按照安全操作规范进行操作，以免对操作人员和动物造成不良影响。