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载体与片段同源重组酶连接不上

相关实验:比较基因组常用分析方法

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Wuli牛牛

载体体和目标片段同源重组连接不上,热激法转DH5α涂板,长出来都是假阳性,载体与片段比例3:1、4:1做过好几次,都不行,要么假阳性,要么直接一个菌落都不长~好郁闷

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2 个回答

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申东熙老伯

有帮助

是不是热激法热激的太久,菌死掉了。

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Wuli牛牛user-title

热激90s

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

碰到难连的片段,首先考虑引物设计问题,载体线性化成功与否,片段与载体比例是否恰当(一般3:1)

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Wuli牛牛user-title

好的 谢谢解答~

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