Tricine-SDS PAGE三层胶的配方及注意事项

以下是Tricine-SDS PAGE三层胶的配方和注意事项：

1. 垂直电泳缓冲液（上缓冲液和下缓冲液）：

• 上缓冲液（Anode Buffer）：25 mM Tris，192 mM glycine，0.1%（w/v）SDS，pH 8.3。

• 下缓冲液（Cathode Buffer）：50 mM Tris，384 mM glycine，0.1%（w/v）SDS，pH 8.3。

2. 聚丙烯酰胺凝胶配方：

• 10%（w/v）聚丙烯酰胺（acrylamide）：将适量的聚丙烯酰胺溶解在上缓冲液中，加入足够的脱氧核苷酸（例如TEMED）和过硫酸铵（APS）作为引发剂。

• 6%（w/v）聚丙烯酰胺凝胶用于分离较小的蛋白质。

3. 上样缓冲液：

• 2×上样缓冲液：包含0.1 M Tris-HCl（pH 6.8），4%（w/v）SDS，20%（v/v）甘油，0.01%（w/v）溴酚蓝。

注意事项：

• 操作时需佩戴手套和护目镜，避免接触聚丙烯酰胺、缓冲液和电泳装置中的有毒或刺激性物质。

• 准备凝胶前，确保聚丙烯酰胺和引发剂完全溶解，避免残留空气泡。

• 需要注意聚丙烯酰胺和引发剂的浓度和比例，以确保凝胶聚合的效果和分离的分辨率。

• 在电泳过程中，保持缓冲液的pH稳定，确保电流稳定并避免过热。

• 根据样品的大小和预期分离效果，调整聚丙烯酰胺凝胶的浓度和厚度。

胶的配制

1. 16.5% T 6% C separating gel 30ml

49.5% T 6% C 10ml

Gel buffer 15ml

Glycerol 3.2ml

Water 1.8ml

2. 10% T 3% C spacer gel 30ml

49.5% T 3% C 6.1ml

Gel buffer 15ml

Water 8.9ml

3. 4% T 3% C stacking gel 12.5ml

49.5% T 3% C 1ml

Gel buffer 4.65ml

Water 6.85ml

配方：

分离胶 积层胶

ddH2O 1.85 mL 2 mL

AB-3 1 mL 250 uL

Gel-Buffer(undefined) 1.65 mL 750 uL

甘油 0.5 mL —

10%AP 25 uL 22.5 uL

TEMED 2.5 uL 2.25 uL

undefinedGel-Buffer 配方：(200mL量)

Tris-Base 48.44g

Tris-HCl 31.52g

SDS 0.6 g

pH 8.45,很难溶，可以60°C水浴促进溶解。

AB-3 (100mL量)

丙烯 48g

双叉丙烯酰胺 1.5g

注意：丙烯溶解后会使溶液体积增大，故只要用约80mL水溶解即可，完全溶解后再定容。通风橱内操作，注意保护自己！

外槽电泳液（+极）（Anode Buffer）1undefined

Tris-Base 46.92g

Tris-HCl 17.73g

500mL体积，pH 8.9。

内槽电泳液（-极）（Cathode Buffer）1undefined

Tris-Base 24.22g

Tricine 35.84g

SDS 2g

200mL体积，pH 约8.25。

分离胶，夹层胶及积层胶的高度分别是1-2cm,2-3cm,2.5-10cm.