求助：想通过双荧光素酶实验做药物对启动子转录活性的影响
科研小白选手Li
我用的方法是带启动子质粒和内参质粒转293T细胞，有几个问题想请教大家
1.药物作用是在转染质粒前还是后？
2.转染质粒后是不是一组不加药物，一组加药物再比较两组的荧光比值从而得出药物对启动子影响？
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3 个回答
Dr_劉医生
有帮助
1、一般是转染前，因为转染质粒后就已经开始转录了，这时候加药物干预来不及；
2、是的，实验组和对照组嘛
科研小白选手Li
感谢解答，还有个问题想请教！是不是用药物作用后就不能再消化铺板了呢？我的药物作用48-72h,细胞那时候一般都长满了，我之前做是消化下来后铺板再转染质粒，这样会不会减弱药物作用呢？还是我细胞铺稀一点，药物作用后直接转染质粒？
loveliufudan
有帮助
1.药物作用一般在转染质粒后，因为要评估药物对启动子转录活性的影响。
2.对比两组的荧光比值来评估药物对启动子影响的确是一种常用的方法。具体而言，通常会有两组实验，一组是不加药物的对照组，另一组加入药物。比较这两组荧光比值，从而得出药物对启动子转录活性的影响。
土井挞克树
有帮助
转染质粒后一组不加药物，一组加药物再比较两组的荧光比值
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