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质粒酶切连接产物的核酸电泳分析
然Z04C
昨日挑菌送测序，今天返回的结果发现4个平板挑12个菌落，挑菌的样本都没有插入目的片段，和空载质粒序列一样。问题1是双酶切后的质粒电泳图是否表示质粒被切开？我发现连接产物跑胶后应该是有重新连接上的，反推得出质粒在上一步酶切时被切开了。问题2是目的片段和空载质粒分别双酶切后再连接，得到的重组质粒跑胶为什么速率比空载质粒快？因为观察line1/2有质粒的三个条带。问题3是line7/8/9/10是否表示重组质粒构建成功呢？平板上都长了菌落，我挑了很多但都是假阳性。
麻烦各位不吝赐教
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3 个回答
毛利小五郎的徒弟
有帮助
虽然有菌落，但是可能是菌落存在假阳性的问题，或者是存在污染，建议重新换个菌落做
周末也要努力呀
有帮助
可能你挑取的菌落没有菌造成这样的结果
然Z04C
假阳性概率蛮高的，我现在一个平板上挑了7-8个点，测序结果全是假阳性，和空载质粒序列一样
高山云初
有帮助
质粒已被切开，被打开的质粒跑的慢，完整的跑的快，建议上样少点，避免裂的过久。可能是PCR模板量不足;可能是挑取的菌落为假阳性; 可能是PCR反应条件不合适。
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