救救救WB求助，好心人帮帮我吧

1.300kd大分子建议分离胶用6%，浓缩胶4%。

2.选择分子量最大的预染MARKER，我用的是250kd，然后在电泳槽周围堆满冰，120ma使劲跑吧，跑两个小时换一次电泳液，一直跑到250kd的MARKER，离开胶释放到电泳液中，大概要用5个小时

蛋白上样量增加到20ul，marker的量减半

要成功分离和检测309 kDa分子量的蛋白质，可能需要考虑以下几个方面：

1. 凝胶浓度：选择合适的凝胶浓度以适应目标蛋白质的分子量。对于较大的蛋白质，通常需要使用低浓度的聚丙烯酰胺凝胶（例如0.6-0.8%）。较低的凝胶浓度可以提供较好的分离效果。

2. 样品加载量：对于大分子量蛋白质，适当调整样品加载量也很重要。对于10 μL的样品加载量，可能需要进一步增加样品浓度，以确保足够的目标蛋白质进入凝胶。

3. 进行长时间电泳：大分子量蛋白质迁移较慢，因此可能需要延长电泳时间以获得更好的分离。尝试增加电泳时间并逐步优化以获得最佳结果。

4. 电泳缓冲液：使用适当的电泳缓冲液可以提供更好的分离效果。常用的电泳缓冲液包括Tris-Glycine缓冲液系统和Tris-Acetate缓冲液系统。根据凝胶类型和蛋白质特性，选择合适的缓冲液。

5. 蛋白质标记和检测：确保你使用的蛋白质标记和检测方法适合大分子量蛋白质。例如，可以使用共染色剂或蛋白质荧光标记剂来检测目标蛋白质。

另外，还要确保实验设备和试剂的质量良好，遵循正确的操作步骤和实验条件。如果你已经尝试了上述建议但仍无法成功分离和检测309 kDa分子量的蛋白质，可能需要进一步优化实验条件，例如尝试不同的凝胶浓度、样品加载量和电泳条件，或考虑使用其他技术如蛋白质电泳转膜和免疫印迹等。