咨询一下培养PBMC的问题谢谢答疑解惑
利亚姆Liam
本人做实验需要培养PBMC，要在体外培养10-14天（文献中有培养到了14天）。想研究某药物对T细胞活性是否起到明显的增强作用，对某些T细胞亚群是否也能起到功能的强化。有些疑问，想问问园子里的大神们。
1、培养的过程中，药物是在培养的第一天加入培养基的，换液的过程中，还需要额加吗？
2、据一些同学说，PBMC培养不了那么久，一周后就不怎么长了。文献上提到可以加入IL-2与CD3/CD28进行刺激，维持细胞增殖。IL-2已经查到可以隔2天加入培养基，CD3/CD28是第一天培养时加入，后面还要不要在换液的过程中也加呢？不知道这个CD3/CD28在培养过程中怎么用。或者，可不可以只加IL-2，不加CD3/CD28，这样能否让PBMC长到2周。
3、PBMC培养过程中，加IL-2与CD3/CD28，主要是促进T细胞增殖，那里面的其他细胞会不会凋亡或者死掉呢？后面还要用PBMC跟肿瘤细胞共培养，怎么去掉这部分死掉的细胞？
谢谢指导，感激感恩
2 个回答
毛利小五郎的徒弟
药物是在培养的第一天加入培养基的，换液的过程中是需要额外添加保持药物浓度稳定的
loveliufudan
1.关于加药物的问题，一般来说，药物加入后需要根据药物的性质和细胞的生长情况来确定换液时是否需要再加。如果药物不稳定或者对细胞生长的影响比较强烈，建议每次换液时都加入适量的药物以保持细胞的生长状态。
2.PBMC的培养时间确实存在一定的限制，不同样本的细胞生长情况也有差异。CD3/CD28是T细胞激活的标准物质，可以促进T细胞增殖和分化，但是不同的细胞亚群对CD3/CD28的反应也有所不同。根据文献提到的方法，CD3/CD28可以在培养的第一天加入，不需要每次换液时都加入。如果想让PBMC长到两周，可以尝试优化培养条件，例如添加其他细胞因子或者维持细胞密度等。
3.加入CD3/CD28的确可以促进T细胞增殖，但其他细胞可能会受到一定的影响，比如细胞凋亡或细胞分化。如果需要去除死亡的细胞，可以使用梯度离心或其他细胞分离方法来分离PBMC。另外，共培养PBMC和肿瘤细胞时，可以根据需要调整细胞密度和比例，以达到最佳的实验效果。
