萌新求教流式细胞术检测CD4,CD8计数

小S货啊小S货

2022-07-21

真心想请教下大家，选择用流式做人血淋巴细胞计数检测。

1.选择抗体方面，CD4 CD8 CD3 CD45抗体染色用的什么APC，750怎么是怎么个选法？CD4等抗体的克隆那么多怎么选？有单抗多抗重组？

2.还有种属小鼠，大鼠什么的又有什么区别？是选小鼠还是大鼠的荧光染料?

3.检测人血淋巴细胞还需要CD45是什么原因，我看研究小鼠淋巴细胞只需要CD3.4.8？

4.检测到什么单阳，双阳又是什么意思？

5.做人血检测有的说是阴性对照，有的说要同型对照，有的又说什么都不要？？

在职做个研究真的不容易，看了好几天，大致了解了一点皮毛，但还是懵逼状态。另外带一句实验室的机子是beckman coulter cytoflex。可检测的激光在下图。

dxy_gm2gspne

2022-07-29

有帮助

楼上回答问题的老哥，我想问一下我要检测小鼠外周血里 hcd45+细胞数量占比，流式怎么操作啊。（纯纯没有操作过流式，望详解，🙏）

Eason老歌迷

2022-07-22

有帮助

你这几个问题，我做一个统一回复。

需要肝素抗凝静脉血1ml，不同荧光素标记的抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体，同型阴性对照荧光物，溶血剂，固定剂，流式细胞仪。

具体操作1、100μ1抗凝血加20μl荧光单克隆抗体，同时做阴性对照。2、避光室温作用20min，溶去红细胞后，固定剂固定。3、上流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，调节荧光补偿，设定阳性参数值，软件将计算出阳性表达细胞比例。

需要注意1、为保证所得结果的可靠性，每次试验前应以标准荧光微球检测仪器的变异系数。2、每次应做阴性对照、阳性对照、正常对照、质控对照，以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。