流式细胞仪如何实时监测胞内钙内流？
丁香实验
我想测定细胞内钙离子内流情况。打算用Fluo4-AM，用流式细胞仪检测加入干预后胞内钙离子变化。我想请教大家，文献中的这幅流式图（上图）是怎么做出来的呢？如何在上机的时候能够显示这样的图形？随时间动态改变？还是后期其他软件合成？文献中的方法见下图。
问了做流式的老师，说貌似只能静态检测某个时间点的MFI。实在很疑惑，请有经验的人解答！（注：只是针对流式细胞仪如何做出这样的图求教，激光共聚焦跟分光光度计方法大家可忽略~）
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6 个回答
西柚味的芋圆
有帮助
把横坐标设置为为时间，纵坐标做为线性荧光强度。先上样跑一小会儿，然后不操作软件，取出样品管加入离子霉素混匀，再收集一小会儿，可观察到往上走的曲线
CXCR3
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将负载fluo-4/AM的细胞上机，根据FSC和SSC值选取淋巴细胞，纵轴检测荧光值，横轴显示Time。先在稳定情况下收集细胞30-60s，然后快速加入刺激抗体后，再收集信号变化10min左右。在流式软件上分析就可以显示出这种图形。
dxy_29k93ve4
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新版flowjo有个kinetics功能，可以显示横轴是时间，纵轴是荧光强度，也可以叠加图
peaceful13
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流式检测钙流～横轴为流式仪器上的Time参数～纵轴为荧光的通道参数～收集一段时间样本后～快速加入刺激剂～然后再继续收样～就可以看到参数的增高变化了～
dxy_0mxazdaw
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先用流式跑一段静息状态下的细胞，得到basal曲线，然后暂停细胞收集，向流式管中加入刺激剂，再继续收集细胞，就会得到如文章中的升高曲线了。
txs900416
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采集数据时用双指数直方图，x轴为时间，y轴为线性荧光强度。先收集样品约1min，然后不操作软件，快速取出样品管加入离子霉素混匀，再收集约5分钟，可观察到信号的上升。
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