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流式细胞术测不同浓度LPS刺激12h后RAW264.7 ,ROS 结果分析问题

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丁香实验

流式细胞术测不同浓度LPS刺激后RAW264.7 细胞ROS水平,FSC 和SSC图中细胞分成明显的两团,并且比例都不是很大,是LPS刺激造成细胞形态大小的变化导致的吗?
操作过程:原位装载DCFH-DA,装载之后用PBS洗涤两遍之后用枪头吹打收集细胞,收集过程中大部分细胞都收集到了,还是滤网的直径太小导致细胞碎裂?请教ROS结果分析





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9 个回答

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西柚味的芋圆

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你做这个的时候有没有用考虑到自发性荧光的影响。同时巨噬细胞类的检查需要先孵育Fc
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dxy_29k93ve4

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左边应该是刺激导致细胞状态不好产生的细胞碎片和快死了的细胞
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马小羊

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raw264.7是非常娇气的细胞,不要说lps刺激了,就是正常养着一段时间也可能出现细胞形态的改变(我们常说的长角)。 fsc和ssc分别指示细胞大小和颗粒度,因为lps刺激后细胞形态改变,并且胞内炎症信号(tlr4)被激活,所以fsc和ssc发生改变是正常的,个人认为后续检测时候,这两个群都要圈上的。
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CXCR3

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一般的滤网不会造成细胞碎裂,最右边一群细胞是受刺激后的细胞,中间的一坨细胞是相对naive的细胞。左边的小点是一些杂点包括死亡的细胞和非细胞。
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peaceful13

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FSC反应细胞大小, SSc反应颗粒复杂程度~细胞分成两群,应该是细胞受到了刺激,细胞状态受到了影响~分析ROS的时候这两群细胞都应该分别圈门看看~如果都有ROS信号的出现~那应该把两群细胞都圈起来进行分析
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颜渊溪桥

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FSC-A 和 SSC-A坐标图反应的是细胞大小可颗粒度,如果在这个途中看到分成两群,考虑的是刺激诱导的细胞状态改变,和ROS的染色不相关。
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txs900416

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一般靠左的可能是死细胞,也可能右边的是刺激组所以细胞变大了。但一般raw这个细胞活化后变大是连续的,不会分为两群,所以考虑死细胞可能性大。建议不要吹太剧烈,可用细胞刮或胰蛋白酶消化,加上死活染料。
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dxy_0mxazdaw

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细胞分成两群,阳性群说明是产生ROS的细胞群,阴性群是没有产生ROS的细胞群。反应的是产生ROS的能力。过滤网不会使细胞破碎死亡的。
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Timy最爱柠檬水

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1⃣️可能由于LPS刺激后巨噬细胞极化分为m1,m2所致。 2⃣️巨噬细胞贴壁较牢,收样时可使用细胞刮。
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