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流式细胞术测不同浓度LPS刺激12h后RAW264.7 ，ROS 结果分析问题
丁香实验
流式细胞术测不同浓度LPS刺激后RAW264.7 细胞ROS水平，FSC 和SSC图中细胞分成明显的两团，并且比例都不是很大，是LPS刺激造成细胞形态大小的变化导致的吗？
操作过程：原位装载DCFH-DA，装载之后用PBS洗涤两遍之后用枪头吹打收集细胞，收集过程中大部分细胞都收集到了，还是滤网的直径太小导致细胞碎裂？请教ROS结果分析
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9 个回答
西柚味的芋圆
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你做这个的时候有没有用考虑到自发性荧光的影响。同时巨噬细胞类的检查需要先孵育Fc
dxy_29k93ve4
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左边应该是刺激导致细胞状态不好产生的细胞碎片和快死了的细胞
马小羊
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raw264.7是非常娇气的细胞，不要说lps刺激了，就是正常养着一段时间也可能出现细胞形态的改变（我们常说的长角）。 fsc和ssc分别指示细胞大小和颗粒度，因为lps刺激后细胞形态改变，并且胞内炎症信号（tlr4）被激活，所以fsc和ssc发生改变是正常的，个人认为后续检测时候，这两个群都要圈上的。
CXCR3
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一般的滤网不会造成细胞碎裂，最右边一群细胞是受刺激后的细胞，中间的一坨细胞是相对naive的细胞。左边的小点是一些杂点包括死亡的细胞和非细胞。
peaceful13
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FSC反应细胞大小， SSc反应颗粒复杂程度～细胞分成两群，应该是细胞受到了刺激，细胞状态受到了影响～分析ROS的时候这两群细胞都应该分别圈门看看～如果都有ROS信号的出现～那应该把两群细胞都圈起来进行分析
颜渊溪桥
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FSC-A 和 SSC-A坐标图反应的是细胞大小可颗粒度，如果在这个途中看到分成两群，考虑的是刺激诱导的细胞状态改变，和ROS的染色不相关。
txs900416
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一般靠左的可能是死细胞，也可能右边的是刺激组所以细胞变大了。但一般raw这个细胞活化后变大是连续的，不会分为两群，所以考虑死细胞可能性大。建议不要吹太剧烈，可用细胞刮或胰蛋白酶消化，加上死活染料。
dxy_0mxazdaw
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细胞分成两群，阳性群说明是产生ROS的细胞群，阴性群是没有产生ROS的细胞群。反应的是产生ROS的能力。过滤网不会使细胞破碎死亡的。
Timy最爱柠檬水
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1⃣️可能由于LPS刺激后巨噬细胞极化分为m1，m2所致。 2⃣️巨噬细胞贴壁较牢，收样时可使用细胞刮。
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