细胞内细胞因子的流式细胞仪检测

 

简介

 

随着研究的进展，仅仅对细胞进行定量和活性的检测已不能满足需要。在单细胞水平研究细胞因子的表达能力对研究细胞因子在疾病中的作用越来越显的重要无比。目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括： ELIspot 、原位杂交、免疫细胞化学、限制性稀释分析（ limiting dilution analysis ， LDA ）和单细胞 PCR ，应用原位杂交技术和免疫组化方法观察细胞因子蛋白表达及 mRNA 表达可以识别 Th1 和 Th2 细胞，此方法可获得较强的细胞内信号，但此方法工作量大、主观性强，难以进行大样本检测，且人肉眼识别能力有很大的局限性，而 ELISPOT 及单细胞 PCR 技术，技术性强、劳动强度大，难以进行广泛推广。随着多标记及胞内细胞因子标记流式细胞技术的出现，使对细胞内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。下面主要对胞内细胞因子流式细胞技术作以介绍。
　　早期细胞因子表达与细胞功能相关性研究是基于特定克隆">克隆细胞的激活。尽管研究应用 T 淋巴细胞克隆">克隆证明了不同细胞因子的合成，如 TH1(IL － 2 ， IFN － ) 与 TH2(IL － 4 ， IL － 5 ， IL － 10) ，但这些研究很难外推，因为 T 细胞克隆">克隆与体内 T 细胞功能相关性还未被揭示。

 

近来， Jung 与 Picker 采用了 monensin 、 PMA 等药物预孵，用 Brefeldin(BFA) 、 Monensin 阻断了胞内高尔基体介导的转运的方法使得细胞因子聚集，蓄积，增强细胞因子信号可被流式细胞仪检测。因为自然状态下， T 淋巴细胞产生少量的细胞因子，通常要对 T 淋巴细胞体外活化进行研究。在体外刺激过程中， T 淋巴细胞产生的细胞因子已释放出来，胞内细胞因子信号较弱，难以进行检测。这一方法可检测单个细胞内多个细胞因子，并可区分表达特定细胞因子的细胞亚群。在细胞水平该方法证明了人与鼠的淋巴细胞都存在 1 型与 2 型分化，且这些分化在特定细胞因子增强时可被逆转。且这些研究清楚地证明，只有激活的细胞亚群可以表达细胞因子，静止的正常淋巴细胞 (T 、 B 、 NK) 不能分泌细胞因子。