利用二代CrisPR技术敲除大肠中的基因后，质粒无法消除，怎么办

可以适当提高培养温度来消除其中的质粒

你可以使用裂解酶 裂解消除质粒哦

一般方法和步骤:

确定目的基因需要整合到基因组上的位置；

设计整合片段：目的基因两端连接与基因组上目的基因的位置两端的序列同源，这两个片段分别称之为上、下同源臂，长度一般在70bp至200之间，上下同源臂之间一般除了目的基因还要带上筛选标记基因，同源臂之间（包括同源臂）这一段序列称为插入片段；

插入片段可以直接电转化或者显微注射转化筛选，一般需要多次实验才能成功，而且大部分细菌暂时无法电转化和显微注射；

不能直接转化的，插入片段需要构建到载体质粒上（在大肠杆菌上完成），载体要带有自杀原件或者负筛选标记，再转化到目的菌株筛选。

把IPTG终浓度提高至1mm，可以消除。

可以适当提高培养温度来消除质粒，如果还无法消除可以添加裂解酶进行裂解

可以用裂解酶和酶切酶把质粒消除掉