关于Raw263.7巨噬细胞极化问题，加LPS后，如何判断诱导其向M1型极化成功了呢？

需要加细胞因子，然后观察m1分泌蛋白的分泌情况判断

为了判断是否成功地将Rav263.7巨噬细胞诱导向M1型极化，您可以考虑以下几个方法：

1.观察细胞形态：M1型巨噬细胞具有更大的细胞体积和更多的粗糙内质网，与M2型巨噬细胞相比，更加吞噬能力强。因此，如果成功诱导了M1型巨噬细胞，您可能会观察到Rav263.7细胞体积增大、吞噬作用增强等变化。

2.检测细胞因子分泌：M1型巨噬细胞通常会分泌促炎性细胞因子，如IL-1β、IL-6、TNF-α等，而M2型巨噬细胞则通常会分泌抗炎细胞因子，如IL-10等。因此，您可以使用酶联免疫吸附试验（ELISA）或实时荧光定量PCR等方法来检测这些细胞因子的分泌情况，从而判断是否成功地诱导了M1型巨噬细胞。

3.检测表面标记物的表达：M1型巨噬细胞通常表达CD86、CD80等共刺激分子，而M2型巨噬细胞则通常表达CD163、CD206等抗炎标记物。因此，您可以使用流式细胞术等方法来检测这些标记物的表达情况，从而判断是否成功地诱导了M1型巨噬细胞。

需要注意的是，判断巨噬细胞的极化状态是一个复杂的问题，需要综合考虑上述方法的结果。此外，不同的诱导条件可能会导致不同类型的极化状态，因此，您还需要根据具体实验条件进行选择和判断。

通过检测M1标志物的抗体包括：IL1B抗体、NOS2抗体、TLR2抗体、CD86抗体等来判断。

M1、M2具有各自特征性标志分子，iNOS、CD86、TNF-α是常见的M1型巨噬细胞的标志分子，可以用以下方法进行分析：

1.WB可以分析RAW264.7细胞iNOS的表达水平；

2.流式细胞术（FCM）可以分析RAW264.7细胞表面CD86的表达；

3.实时定量 PCR 和 ELISA 可以分析TNF-α细胞因子的表达及分泌；

4.Griess reagent 可以分析细胞培养上清 NO 生成。不同样品对RAW 264.7中NO产生的影响