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求助免疫荧光实验的问题?

相关实验:免疫荧光技术

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DOC06

如果免疫荧光实验时孵二抗时间过久会有什么影响?有没有什么补救方法呢?

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5 个回答

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心细北方

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用PBS多洗几遍应该好一些,楼主可以试试!

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sswei

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抗体孵育时间过长易增加背景着色。这可通过缩短二抗孵育时间、稀释抗体来控制。

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毛利小五郎的徒弟

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会非特异性染色,背景过高,尽量减少二抗孵育时间

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balalaLy

有帮助

二抗时间久的话只能洗多两次或者洗久一点

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loveliufudan

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如果免疫荧光实验时孵二抗时间过久,会导致二抗结合到非特异性的细胞或组织部位,引起背景信号的增加,从而降低实验的特异性和灵敏度。此外,过长的孵育时间也可能导致荧光信号饱和和淬灭等问题。

为了避免孵育时间过长,可以考虑以下一些措施:

优化二抗浓度:根据前期实验结果,优化二抗的浓度,选择适当的二抗浓度,可以有效地缩短孵育时间。

缩短孵育时间:通常,免疫荧光实验二抗孵育时间一般为1-2小时,如果实验条件允许,可以缩短孵育时间,以避免过度孵育。

洗涤次数增加:增加洗涤次数有助于清除非特异性结合的二抗,从而减少背景信号。

添加显色底物或信号增强剂:如果荧光弱或淬灭,可以添加显色底物或信号增强剂,增强信号。

总之,避免孵育时间过长是保证免疫荧光实验特异性和灵敏度的重要措施,可以通过优化二抗浓度、缩短孵育时间、增加洗涤次数等方法来实现。如果实验中出现荧光信号饱和或淬灭等问题,可以添加显色底物或信号增强剂来增强信号。

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