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免疫组化的问题求助?

相关实验:免疫组化

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lyang556

免疫组化用苏木素复染,苏木素配制:5ML原液,加20ML蒸馏水,复染时间1min,DAB染色的棕黄色全部被蓝色覆盖,不知道是怎么回事,求助!

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3 个回答

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sswei

有帮助

DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现浅棕色本底时即可冲洗;

DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就被覆盖,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间;

此外,若很短时间就出现背景很深,还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全,需要延长封闭时间。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

用pbs多清洗几次,考虑是染剂浓度过大

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loveliufudan

有帮助

可能是苏木素染色不均匀或者染色时间过长导致的。建议您可以尝试以下方法:

确保苏木素染色的浓度准确。您提到的苏木素配制是将5 mL 原液加入20 mL 蒸馏水,但是原液的浓度可能会因品牌和批次的不同而有所差异。因此,最好检查一下您使用的苏木素原液的浓度是否正确,并且确保正确计算配制液的浓度。

确保苏木素染色的时间不要过长。苏木素染色时间太长可能会导致颜色过深,从而覆盖DAB染色的棕黄色。您可以尝试缩短苏木素染色的时间,或者减少苏木素原液的浓度来避免过度染色。

检查组织切片是否存在问题。如果组织切片存在问题,例如表面存在气泡、破裂或滑片时移动,可能会导致苏木素染色不均匀或者DAB染色被覆盖。因此,建议您检查组织切片是否存在这些问题,并重新制备和染色切片。


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