BM–DC好难诱导条件摸了无数次

建议增加G M- CSF的诱导量和诱导时间

BM-DCs是一类来源于骨髓的树突状细胞，对于BM-DCs的诱导条件需要根据具体实验设计和目的进行优化。以下是一些常用的BM-DCs诱导条件和注意事项，希望对您有所帮助：

原代骨髓细胞的准备：骨髓细胞的质量对于BM-DCs诱导和分化的成功至关重要。建议使用2-3个月龄的小鼠，选择腿骨、胫骨、股骨等骨骼骨骼骨髓作为来源，并在操作前对小鼠进行消毒。

细胞培养基的选择：常用的BM-DCs培养基包括RPMI-1640、DMEM、IMDM等，其中最常用的是RPMI-1640。可以添加10% FBS等血清，以及L-半胱氨酸、钾盐、钠盐等添加剂。为了减少细胞因子的干扰，建议使用低内毒素或无内毒素的培养基。

细胞分化诱导条件的优化：一般情况下，GM-CSF和IL-4是BM-DCs分化的两个关键细胞因子，可以将它们加入细胞培养基中，建议使用10ng/mL GM-CSF和10ng/mL IL-4。此外，也可以添加其他因子或小分子激动剂来优化诱导条件，如PGE2、CD40L、LPS、Flt3L等。

细胞密度的调整：细胞密度的过高或过低都会影响BM-DCs的分化和成熟。一般来说，建议在诱导细胞培养皿中加入2-4×10^6个细胞/mL。

细胞培养条件的优化：BM-DCs的诱导和培养需要在无菌条件下进行，细胞培养皿需要进行表面消毒，培养过程中需要严格控制培养皿内外的细菌和真菌等污染源，以避免对细胞分化和成熟的影响。

有许多方法可进行。Lutz法与Son法相似，均可大量制备BMDC。Lutz法与Inaba经典方法和Son法的最大不同是使用细菌培养皿（Petri dish）而非细胞培养板来培养骨髓细胞。Ⅰnaba法是细菌培养皿不容易使骨髓中的巨噬 细胞贴壁，从而抑制巨噬细胞的发育，进而避免巨噬细胞对DC成熟的抑制作用， 这可能是该法能够以较低铺板密度获得大量 BMDC 的主要原因。但该法的培养时间较长，需要10-12天，一方面是为了获得更多的BMDC，另一 方面，大多数粒细胞和淋巴细胞很难存活这么长时间，因此可提高最终获得的BMDC的纯度；该法仅用GM-CSF进行诱导培养，得到的BMDC中未成熟和成熟DC均有，若 要进一步提高成熟度，需用LPS或TNF-α再诱导1-2 天，其中成熟DC细胞的含量将达到50-70%。