请问免疫组化DAB染色不均是什么原因，一抗已经全部覆盖，已经封闭画圈

免疫组化染色时是否将片子置于湿盒中，如果染色温度和湿度控制的不好，可能使画圈附近试剂偏少的地方液体挥发，导致显色的程度不同。建议放入湿盒反应，并适当增加试剂的量。

考虑以下几点：

　　（1）、抗体浓度过高

　　（2）、抗体孵育时间过长或温度较高

　　（3）、DAB变质和显色时间太长

　　（4）、组织变干

　　（5）、切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长（大于24小时）。

• 可能脱蜡不彻底，延长烤片温度和时间
• 操作过程可能干片了，可以用疏水笔圈好，避免干片和清洗和抗体孵育不均

有可能是抗体特异度不高，孵育时间过长导致的

有可能是孵育过程中出现了干片造成的影响

应用于免疫组织化学染色的切片，对切片的质量要求较高，切片必须完整，平展、无汽泡，无邹折，这样有利在染色时的冲洗，有利于切片的牢固附贴。如果切片不平展，免疫组化染色后，可出现染色不均匀的现象，颜色深浅不一。