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非标签抗体常用的纯化组合方式有哪些?对缓冲液的依赖性大吗?

相关实验:抗体纯化实验

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野有蔓草1225

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3 个回答

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土井挞克树

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非标签抗体常用的纯化组合方式有哪些

1.沉淀法

2.离子交换层析

3.Protein A/G亲和层析

对缓冲液相对依赖不大

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Eason老歌迷

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有很多。比如说 盐析法(饱和硫酸铵沉淀法),正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法,Protein A 和 protein G 纯化法, 免疫亲和纯化法等。

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抗体制备出来之后,需要进一步纯化得到纯的多抗或单抗,既有利于保存也有利于排除杂蛋白对结果的影响。常规用于纯化的材料是腹水和细胞培养上清,而通常经过免疫制备的抗体大多数是IgG的各种亚型,以及少数是IgM,二者电泳条带分步大致如下:抗体 非还原型PAGE/kDa 还原型PAGE/kDaIgG 150 50,25gM 900 65,25IgM单体 180 65,25硫酸铵沉淀法:基本原理:高浓度的硫酸铵通过与球蛋白竞争水分子破坏蛋白表明的水化膜,降低球蛋白的溶解性,是分离免疫球蛋白的常用方法,而且不同的免疫球蛋白适宜的硫酸铵浓度也稍有差别,一般用来分离抗体的硫酸铵饱和度在33~50%。适用于:鼠抗所有亚类、其他种属抗体、任何种属的IgM、IgG、IgA

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