小鼠骨髓干细胞-全骨髓法，骨片法，求助！

相关实验：小鼠骨髓造血干细胞及基质干细胞分离

C5O0

2022-09-06

全骨髓法P0满4天，严格按照差速贴壁法原则来换液，结果爬出来的都是间质样细胞，而且异质性高，也并未发现哪怕一个细胞克隆；

最近用了骨片法，按照一篇nature protocol来做的，但是培基一加，骨片全脱落了下来，基本无法贴壁，在园子看见有朋友展示了细胞从骨片爬出的照片，所以想发帖问问大家，如何让骨片贴壁呢？

以及胶原酶消化多久，骨密质要剪多碎？

感谢！

2 个回答

Dr_劉医生

2022-09-08

有帮助

首先你P0原代就出现问题，是不是考虑骨髓取材的部位？当然密度梯度离心法也可能导致细胞流失；现你换了贴壁分离的方法，依旧没看到，所以我还是倾向于骨髓组织取材制备的问题；最后那个传代建议使用胰酶浓度为0.05%进行消化。消化每t25培养瓶加胰酶1ml。消化时间约1-2min内，t25培养瓶培养液约7ml完全培养基。

毛利小五郎的徒弟

2022-09-06

有帮助

一般骨组织剪成约1～3mm3的碎片。

消化酶可以选择1mg/mL Ⅱ型胶原酶于37℃摇床中振荡消化。