小鼠骨髓干细胞-全骨髓法，骨片法，求助！

首先你P0原代就出现问题，是不是考虑骨髓取材的部位？当然密度梯度离心法也可能导致细胞流失；现你换了贴壁分离的方法，依旧没看到，所以我还是倾向于骨髓组织取材制备的问题；最后那个传代建议使用胰酶浓度为0.05%进行消化。消化每t25培养瓶加胰酶1ml。消化时间约1-2min内，t25培养瓶培养液约7ml完全培养基。

一般骨组织剪成约1～3mm3的碎片。

消化酶可以选择1mg/mL Ⅱ型胶原酶于37℃摇床中振荡消化 。