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免疫荧光一定要用共聚焦显微镜看吗?

相关实验:免疫荧光技术

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balalaLy

免疫荧光一定要用共聚焦显微镜看吗?投稿的时候被审稿人质疑用的普通显微镜看片,没有用共聚焦。问题是感觉两个也看不出有啥差别啊?

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3 个回答

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秋秋欣欣

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普通荧光显微镜也是可以看的啊。

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申东熙老伯

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免疫荧光肯定要用共聚焦显微镜看。因为用普通显微镜虽然也可以看到,但是分辨率会比共聚焦显微镜低很多。所以一般免疫荧光染完色之后是先用普通显微镜看一下趋势,再拿去拍共聚焦。

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Eason老歌迷

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怎么没区别?共聚焦显微镜包括机械部分、照明部分和光学部分。但不同于传统光学显微镜,共聚焦显微镜的光源为点光源,通常由HeNe激光器发射。共聚焦显微镜在光学部分增加了扫描装置、共聚焦系统。共聚焦显微镜和传统显微镜不同,共聚焦显微镜用单色激光作为光源,在入射光滤光片前面加一个针孔装置使入射光源变成点光源,点光源相比普通的场光源方向性更强、发散更小、强度更大,能够在某一时间点激发焦平面内单个样品点的荧光信号,周围的样品点对被激发点的干扰极小,从而大大提升了显微镜的XY轴分辨率。在信号检测器的前方也设置了一个针孔装置,光源针孔和检测针孔的位置都刚好位于物镜的焦平面上,但通过半透半反镜(分光器)的作用之后,两者的位置形成“共轭”,这就是所谓的“共聚焦”。共聚焦的成像方式能很好地阻挡非焦平面的信号,进而提升显微镜的Z轴分辨率。在此基础上,共聚焦显微镜通过扫描装置通过点光源对样品进行逐点、逐层扫描,使得不同的扫描点都位于物镜的焦平面处,使检测器捕捉更多的样品细节。

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