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卵巢组织如何提取巨噬细胞?

相关实验:免疫荧光技术

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实验小助理静静

求助大神卵巢组织中如何提取巨噬细胞,采用什么方法能最大程度保留巨噬细胞活性呢?能否提取出来检测巨噬细胞的吞噬功能呢?

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4 个回答

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bamboopiggy

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将组织研磨成单细胞悬液,然后用CD68标记巨噬细胞M,φCD163标记M2,进行流式分选

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balalaLy

有帮助

组织用胶原酶消化成单细胞,染巨噬细胞Marker,进行流式分选

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汤姆卜丽波

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卵巢组织不太清楚,有一篇文章是从子宫内膜提取的,方法如下,你看看有用没,免疫组织化学染色:将获得的标本制成厚离EAMs。首先用含1%青链霉素的无菌PBS清洗异位的体积比例放置37℃水浴锅消化40~60min,每组织。在RPMI1640培养基中加入0.1%IV型胶原酶、0.02%透明质酸酶、0.004%DNA酶混匀,最终配联苯胺(DAB)染色1min,苏木素复染5s,盐酸乙过100目筛网过滤一次,滤去残余组织,得到单细灶,新鲜组织离体之后尽快(<2h)分离培养。每例EMs异位病灶取长径为4~6cm,采用筛网过滤分醇分化,最后冲洗返蓝,脱水透明,封片。制成混合消化酶溶液。将组织与混合消化酶按1:3洗掉一抗,滴加酶标羊抗兔IgG聚合物,37℃孵育10min混匀颠倒,直至组织呈胶冻状。再将细胞经胞悬液,然后加入含10%胎牛血清的RPMI1640完全度2μm的切片,用酶标抗体法进行检测。首先在培养液终止消化。取一支适当的离心管,加入与单1.2.2原代EAMs的分离提取:EMs患者手术切除病酸钠修复、3%过氧化氢灭活内源酶,然后分别滴加细胞悬液等量的分离液。吸取过滤过的单细胞悬液室温下进行二甲苯脱蜡、梯度乙醇依次脱水、枸橼病灶3遍,去除血污,剪碎至直径<1mm3的乳糜状CD68、CD163一抗(1:200)进行孵育,放入湿盒内4℃孵育过夜。第2天,37℃复温30min,用PBS40min,PBS冲洗3次,滴加适量新鲜配制的二氨基平铺于分离液液面上,过程始终保持两液面晰。室温,以500~900×g离心20~30min。离心后,液洗涤白膜层细胞,250×g,离心10min。最终用RPMI1640完全培养基重悬细胞,分离所得细胞置后每隔2d换液,每日用倒置显微镜直接观察细胞形态和细胞生长情况。待细胞生长铺满80%细胞皿释液层、乳白色淋巴细胞层、透明分离液层、红细可见离心管中由上至下细胞分四层。分别为:稀于37℃、5%CO2培养箱中培养。2~4h后换液,此胞层,用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞至另一洁净的离心管中,向离心管中加入细胞洗涤后,即可传代。

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天一湖医者

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可以采用流式细胞术结合免疫方法提取。

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