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如何去除RNA提取过程中的蛋白质污染

相关实验:长链非编码RNA的研究策略及技术

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大彬大彬

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6 个回答

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迟C迟

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可以用氯仿抽提之后离心,离心后分三层,下层有机层中有一些脂溶性的杂质,中间层白色絮状沉淀是蛋白,上清液中即含有核酸。也有很多试剂盒,是可以把核酸挂在柱子上,把蛋白质等杂质离心掉。

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bamboopiggy

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你提rna的时候,保证吸最上层液体的时候,不要碰到底下的那个白色的片片就没问题。或者舍弃一部分含rna的液体,就吸400ul,一般就不会有蛋白质的污染。

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未来9

有帮助

1、可以加入0.25倍体积的RNA沉淀液去除RNA中的多糖和蛋白聚糖。(1.2M NaCl 0.8M 柠檬酸钠)

2、吸取上清的时候小心点,吸取少点

3、试试增加酚氯仿抽提次数。每次抽提尽量充分混匀

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dxy_gwrp7ndq

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提组织的RNA有的时候蛋白的含量会很多,可以在加TRizol和氯仿抽提完第一次以后不加异丙醇,而直接加入TRizol氯仿再抽提一次,第二次抽提后会发现中间的蛋白明显减少的,如果感觉蛋白还是很多的话,再抽提一次也是可以的。

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府宅

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蛋白污染可以考虑用酚氯仿多抽提几次,记得吸上清的时候小心点,宁可浪费也别吸到界面.一般后续还需要用氯仿/异戊醇抽提来去除酚.这样基本蛋白污染就可以去干净.实在不行,抽提一次后,就用蛋白酶K消化30min,再抽提.

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天一湖医者

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确保不要吸入中间层及有机相。 减少起始样品量 , 确保裂解完 、彻底。加入氯仿后首先要充分混匀,并且离心分层的离心力和时间要足够。

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