做小鼠基因型鉴定，条带要么不出要么出了杂带，换了很多primer，体系，裂解液。求问大神解救😭该咋办？

小鼠基因型鉴定同时包含了2个实验步骤：1.动物组织基因组DNA提取；2.gDNA的PCR与电泳。建议分步确定实验体系，例如，Nanodrop检测抽提后的gDNA的OD值，是否满足260 280和230的设定比值来确认第一步；用实验室已确认的其他基因对应引物PCR进一步确定gDNA的质量和PCR酶对于该体系是否合适；若没有问题，则多设计几对引物用已知基因型的鼠gDNA做验证，选出合适的引物进行检测，最后如果有余力优化温控程序。如果杂带不能完全消失也没有关系，利用预测目的系列长度和已知对照样品确定主条带即可。

首先检查一下的dna浓度和质量

其次确定合适的pcr反应条。

最后合适的酶 合适的引物 反应条件。

可以考虑优化抽提方法，保证基因组DNA 质量。在PCR 反应体系中，基因组DNA 的浓度也会影响PCR 的效率。基因组DNA 过多或过少都有可能导致PCR 扩增失败。可以考虑调整PCR 反应体系。若PCR 鉴定出现非特异性条带，可以考虑提高退火温度，以提高引物的特异性结合。

小鼠typing要把握的几个点：1、是组织消化是否得当，一般使用碱消化是没有什么问题的；2、primer只要特异性没问题，Tm恰当，是不会有什么问题的；3、Taq酶是一个比较重要的东西，我之前用一个公司的怎么都p不出，换了一个公司的就好了，主要原因是taq酶的特异性和扩增效率