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恶犬鲜生
2022-02-23
没有封闭特异性结合或者封闭不充分如何解决?
郭郭的郭郭
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1、洗涤不充分,膜没有洗干净。2、封闭不充分,一抗可能直接结合到膜上,造成二抗孵育时在非特异性位点发生结合。3、一抗/二抗浓度太高,出现非特异性结合。
要解决封闭不充分这个问题,可尝试延长封闭时间,也可更换封闭液。常用的封闭剂有 5% 脱脂奶粉、5% BSA、血清和明胶等,推荐室温封闭 1 小时以减少背景。另外,脱脂奶粉常含有酪蛋白,由于酪蛋白会结合磷酸化抗体而易产生高背景。因此,检测磷酸化蛋白时建议用 BSA 作为封闭剂。
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