组织切片免疫荧光双标法染色，背景异常的问题？

1.适当延长封闭时间，每次洗涤时要充分（个人认为这点洗涤很重要，不是洗的时间足够长就可以的，比如15miundefined3次就不如5miundefined5次），尽量减少非特异性染色；2.切片尽量薄3。共聚焦拍照的话，配套软件很好，可以修得很漂亮

坏死组织灶，组织坏死后细胞破坏、酶的释放、蛋白游离、分解，复杂的肽链残段（如Fc段）可能与一抗或/和二抗结合导致最终着色。解决办法是在选择染色切片时应避免选择坏死组织较多的切片。

一个是红色荧光，一个是绿色荧光，在绿色荧光层面上会出现比较强的背景，甚至假阳性，而红光层面上背景较少，请问怎样消除或减弱绿光的背景，双染时两种二抗的滴度较之单染需不需要修改。