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大鼠脑组织的免疫组化,片子出现团块是什么原因?

相关实验:石蜡切片免疫组化实验

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xiaoyu19870828

我头一次做免疫组化,但遇到的问题却不晓得怎么解释,希望各位高手能指点下。大鼠脑组织,MCAO模型,取半影区做免疫组化,用的一抗是abcam公司的,浓度用了1:250,采用的是ABC法,ABC试剂盒是买的中杉金桥进口分装的那种,DAB也是中杉金桥的,在DAB染色后出现了阳性表达的核团,而且表达比较不错,然后用苏木素染核,在显微镜下观察,整体都还不错,无论是核的颜色还是特异性表达的颜色都不错,之后脱水,透明,封片,再观察,之前DAB染的色都没有了,整个片子都是蓝色的细胞核和一些蓝色的像是一团纤维组织样的团块,这是什么原因呢?求指教……脱水的步骤:无水乙醇——90%乙醇——85%乙醇——70%乙醇——50%乙醇各5min,透明:二甲苯两次,每次5min。
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3 个回答

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handeping

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以前做脑组织HE染色时就发现会出现均质红染的纤维样团块,团块数量每只鼠不一样,分布位置主要在白质,有的团块很大,有的较小。当时不是自己的试验,所以没有太关注为什么会有这些变化。所以推测你组化阳性染色的地方也可能是这些地方,会不会是非特异性染色。
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苹果嘿嘿

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脱水的乙醇梯度顺序反了 应该是50%-75% -90%-100%-二甲苯,另外也同意楼上的同学观点 真正的DAB显色不可能洗掉的 如果洗掉了 有可能是DAB的沉淀,也就是你配制DAB的时间过长了 DAB要现配现用 配制超过15min再使用就就有可能出现沉淀
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sssea0508

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根据你的描述DAB显色出现“阳性表达的核团”,如果是一团一团的,那就是DAB颗粒沉在片子上的一洗就没了,而不是你需要的阳性染色
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