【求助】【求助】有PCR的高手请教一个片子

这个是我今天跑的很失败的普通PCR结果。

我是一个新手，所以···实在很失败

cDNA做的PCR，反应体系是塔克拉的，那种非预混的酶体系

胶是2％的

可是结果，这些条带很奇怪···求教高手···万分感谢！

电泳液换新的。胶浓度不要那么高。0.8-1%即可！

是不是电压的问题

应该是电压的问题，电压或者电流太高了把，我也出现过类似情况，跑慢点就好了！

缓冲液的问题

仔细看了一下这个图，MARKER跑的挺正常的，应该与电压、缓冲液、胶浓度等电泳中的参数关系不大。不过MARKER没怎么跑开却是个问题。目的条带出现这样的问题，应该是PCR过程中产生的。可能这些条带并非是你引物特异性扩出的目的条带。如果PCR非常成功的化，目的条带会很亮且跑电泳时一般不会出现这样的怪带。建议优化PCR反应条件，如改善退火温度、新换反体体系、换台PCR仪等试试看。

调整一下加模板的量，可以在PCR体系中加入DESO

首先你看一下你要扩增的目的条带多大，上面那条带是不是你要的目的带，如果是，你只需提高一下温度消除下面的引物二聚体即可；如果不是，那温度你要继续摸索一下，再不行就换引物了。这个Marker没跑开，胶需要再跑一会或者胶做稀一点；样品条带弯曲不是一条线，可能是样没点好，孔中有气泡，样不是均匀分布的

可能是胶的浓度太高了，还有胶放在TBE中太久了，也会出现这种效果

大侠们啦，绝对不存在胶浓度2%太高的问题，我们要用电泳分型差异在20bp左右条带时得用4%的呢，只要煮透就好用。不知楼主这胶是现配先用的吗？胶孔暴难看嘛。PCR产物的问题，鉴定完毕！

应该是胶没有煮透，琼脂糖没有完全溶解，导致胶的浓度不均一。

你的胶是不是回收后反复用的啊，要现用现配，回收后反复使用一两次可以，多了就会出现这种情况，另外电泳液也该换了。

现配先用的胶，不该是胶的问题，因为marka很直，我觉得应该可能是PCR的时候出问题了，不过后来就没有这样的图了，还是谢谢各位高手的指导！