常规做法,冰冻切片 (GFP和RFP 荧光蛋白)
1)4% 多聚甲醛固定,室温3-6小时,
2)换新鲜固定液4度 overnight,
3)PBS洗一次,
4)换30% sucrose in PBS,直道样品沉底
5)换1:1 of 30% sucrose in PBS : OCT,overnight or few hours,
6) 换100% OCT overnight or few hours,
7)包埋,-70度 贮存,
8)切之前把样品转移到冷冻切片机里,至少半小时或者简单的办法,取样品的时候,直接液氮冷冻,-80度贮存,然后切片之前转移到冰冻切片机里半小时,再切片。 但是形态学不太好!