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一个基因有三个转录变体,克隆基因时会对测序结果造成影响吗,影响克隆基因吗

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dxy_j53gvwy


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3 个回答

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huarenqiang5

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一个基因有三个转录变体时可以用以下两种方法进行基因测序:

1.设计CDS引物,通过提取组织RNA,并设计相应引物,运用PCR的方法获得目的基因CDS序列,连接到克隆载体后,挑取单克隆进行测序。这种方法相对成本较低,但是PCR过程可能引入突变。适合基因CDS序列较短的情况。

2.全基因合成:根据目的基因的CDS序列,直接交给公司设计合成目的基因。此方法优点准确性高,相对成本会高一些,需要专业的合成公司完成。适合基因CDS序列较长或者人工改造的任何基因序列。有些公司会将目的CDS序列连接至克隆质粒载体上,此时我们可以通过两种方法获得:A:CDS两端限制性内切酶进行酶切,将酶切后片段通过胶回收方式连接至载体。B:设计引物将CDS区通过PCR方法获取,注意如果序列较长,最好使用高保真酶,防止PCR过程中碱基突变。

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loveliufudan

有帮助

基因具有多个转录变体是很常见的现象,这些转录变体的存在可能会对克隆基因和测序结果产生影响。具体来说,如果你只克隆了其中的一个转录变体,那么你在测序结果中就只能看到这个转录变体的序列信息,而无法获取其他转录变体的信息。如果你需要研究这个基因所有转录变体的功能或相互之间的关系,就需要考虑克隆所有转录变体。

此外,在克隆基因时,如果基因具有多个转录变体,就需要选择相应的引物来扩增需要克隆的转录变体。如果你选择的引物没有特异性地扩增你需要的转录变体,就可能扩增到其他转录变体的序列,导致克隆结果不是你想要的。因此,在进行克隆之前,需要仔细设计引物,并进行充分的验证。

总之,基因具有多个转录变体是常见的现象,需要在克隆和测序中进行考虑,以确保获得准确的结果。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

会有影响,会在不想要的变体造成克隆或结合。

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