蛋白纯化失败怎么改进

氨苄抗性的质粒表达两个基因，都无突变。但是在进行IPTG梯度诱导时只有一个蛋白条带大小正确，另一个重新诱导，更换诱导浓度仍无条带。将有条带的蛋白进行纯化却无结果，填料上的蛋白条带还很亮，洗脱开始就一直没条带，甚至更换10mm的咪唑都无条带，想请教一下怎么改进实验呢？有更换载体的打算