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含有带GFP标签表达蛋白质粒的BL21菌,在抗性板上生长时或在试管中摇起来后为什么会发绿,此时并未加IPTG诱导,是操纵子非特异的启动,还是杂菌提供了乳糖?
晓雨知春来
有可能是细菌污染了,你可以进行无菌实验和分析以确认是否存在背景杂菌。
loveliufudan
BL21菌株通常不具有内源性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性,因此在无诱导剂(如1PTG)存在的情况下不应该产生绿色。然而,有几种可能的解释可以解释您观察到的现象:
1. 背景杂菌:有时候,BL21菌培养过程中可能存在背景杂菌,其中某些杂菌可能具有内源性的β-galactosidase活性,导致绿色产生。这些杂菌可能在无诱导剂存在时利用培养基中的残余乳糖产生绿色。
2. 低水平的非特异性启动子活性:某些BL21菌株可能表现出低水平的非特异性启动子活性,即使在没有诱导剂存在的情况下也能产生一定程度的蛋白表达。这可能导致一些带有GFP标签的蛋白在菌体中表达并显示绿色荧光。
为了确定绿色荧光的来源,您可以进行一些对照实验和进一步的验证:
1. 负对照:将未携带GFP标签的质粒转化到BL21菌株中,看是否产生绿色。如果没有绿色产生,那么绿色可能是由带有GFP标签的蛋白质粒引起的。
2. 验证背景杂菌:进行无菌实验和分析以确认是否存在背景杂菌。检查您的菌液和培养基以排除杂菌的可能性。
3. 进一步验证:进行Western blot或其他蛋白质分析方法,以确定GFP标签蛋白是否真正表达。
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可能是里面长了杂菌,影响了其生长
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