ELISA样本孔加入显色液后没有显色，是什么原因?

标准品孔显色，而样品不显色，排除试剂和实验步骤的因素，就是样品出问题了，可能是降解了或者浓度太低，重新提取样品吧

1.包被原：包括你的包被液有无问题，有没有配错。包被原一般加100微升，37度2小时；

2.封闭：封闭液用的是否适合？你说做了几次都没显色，空白孔也不显吗？如果空白也无颜 色，那封闭就没有问题。一般封闭是200微升每孔，也可以满孔封闭

3.一抗：检查你的一抗是否失效。是否是在37度反应

4.二抗：底物，底物缓冲液……这些都要好好检查！

5.洗涤：用PBST洗涤，包被和封闭时洗板3次；一抗二抗洗涤5次，每次间隔3分钟。手工和机器洗涤没什么不同，就是省力一些。洗5次不会有负影响，在一抗和二抗洗涤过程中，恰恰需要多洗几次，这样有助于减少非特异性吸附。

样品浓度太低，或者样品存在降解，建议重新加样

样品孔不显色，可能是样品中的细胞因子或所测物质含量较低，难以检测出来

出现这种情况可能有以下几个原因：

1. 样本浓度太低，低于试剂盒的检测范围。建议在下一次实验中细胞培养时间延长，这样可以提高样本浓度，并设置不同的浓度梯度。

2. 样本中存在干扰物质，如胆固醇、脂质等。这些物质可能会干扰ELISA试剂盒的结果。建议进行样本预处理，如进行脱脂、去除中间产物等处理。

在ELISA实验中，如果标准品显示良好的显色，但样本的所有孔都没有显色并且OD值低于标准品空白组，可能有几个潜在的问题导致这种情况：

1. 样本浓度过低：样本中待测物的浓度可能低于ELISA试剂盒的检测范围或下限。这可能是由于细胞培养上清液中的目标物质含量较少或稀释过高。尝试以适当的倍数稀释样本并重新测量，确保目标物浓度在试剂盒的检测范围内。

2. 样本处理问题：样本的不正确处理可能导致目标物被破坏或失活。确保在采集和处理样本时遵循试剂盒提供的操作指南，避免可能影响目标物稳定性的因素。

3. 实验操作错误：检查实验步骤是否正确执行，包括试剂添加的顺序和时间、洗涤步骤的彻底性等。确保操作过程中的各个步骤准确无误。

4. 检测系统问题：检查ELISA仪器和试剂盒的储存条件，确保试剂的有效性和仪器的准确性。检查底物反应液和底物反应时间是否正确。

原因：

一、不同试剂盒或不同批号的试剂混用

二、标准品稀释方法错误

三、标准品有未加酶结合物而认为已加入

四、终止液误作洗涤液稀释或当底物液使用

五、显色液变质

六、洗涤液配制有误