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有沉淀是因蛋白没有变性完全,可以适当提高SDS浓度,同时将样品煮沸时间延长;也不排除抗原浓度过高,这时再加入适量上样缓冲液即可。
loveliufudan
如果煮蛋白的时候出现沉淀,可能是因为溶解缓冲液中的成分不足以完全溶解蛋白质,或者在蛋白质溶解过程中发生了其他问题。下面是几种可能的解决方法:
加强溶解缓冲液的成分:尝试加入更多的溶解缓冲液,或者加入额外的溶解剂(如尿素、甘油等)以帮助蛋白质溶解。
增加煮沸时间和温度:将煮沸时间和温度增加一些时间或提高温度,以帮助蛋白质充分溶解。
过滤蛋白溶液:使用0.22微米的滤膜过滤蛋白溶液,以去除杂质和沉淀。
更换新的蛋白提取方式:如果以上方法都不能解决问题,可以尝试使用其他蛋白提取方式,例如使用更强效的提取缓冲液,或者尝试使用其他蛋白质提取方法。
需要注意的是,在蛋白质煮沸过程中,有些蛋白质可能会不稳定,易于聚集和凝集形成沉淀,因此在进行Western blot实验时,应该注意蛋白质的溶解和处理条件。
毛利小五郎的徒弟
说明蛋白样品浓度过高,已经超出了SDS可以结合的浓度。建议降低样品的浓度即可
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