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用氰基硼氢化钠去做蛋白质N端peg修饰时,应该怎么操作啊,这个东西很毒,以前都没接触过,操作中有哪些注意事项?操作完如何对废液进行处理?
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储存氰基硼氢化钠时,应避免过热及接触火源、水、潮湿空气、强酸或强氧化剂。氰基硼氢化钠遇强酸会立即生成氰化氢,与空气中的水分接触也会逐渐分解生成氰化物,使用时必须小心。远离酸、氧化剂。
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氰基硼氢化钠(CNBH)是一种强还原剂,用于去除蛋白质N端的PEG修饰。由于其具有毒性,使用时需严格遵守安全操作规程。
以下是一般的操作步骤和注意事项:
在操作前应穿戴好防护服、手套、护目镜等个人防护设备,确保实验室内通风良好。
准备CNBH处理液:将CNBH溶解于无水DMF中,浓度一般为10-20mg/mL。
取出需要去PEG修饰的蛋白质样品,加入CNBH处理液中。处理液和样品的体积比一般为1:10-20。
在室温下,用磁子或转速慢的摇床轻轻摇晃,保持反应2-4小时。
处理完后,用适当的缓冲液(如PBS)洗涤蛋白质样品,去除多余的还原剂和副产物。
将蛋白质样品进行Western blot等进一步实验。
处理废液时,CNBH属于有害化学品,应按照当地法规进行处理。一般的处理方法包括中和和稀释。可以将CNBH处理液和缓冲液混合中和,或者将CNBH处理液在通风良好的实验室内稀释后处理。
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注意个人防护,环境保护,通风,超净工作台,注意手套等个人防护