Western

Western blot分析中出现背景干扰和非特异性条带通常是由以下几个原因引起的：

细胞裂解不充分：如果没有彻底裂解细胞，残留的细胞组分可能会与检测目标交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强。

靶蛋白含量过低：如果目标蛋白含量太低，可能无法被充分检测到，从而导致非特异性条带和背景信号增强。

抗体特异性不佳：如果使用的抗体与非特异性结构类似的蛋白结合，可能会引起交叉反应，导致非特异性条带和背景信号增强。

次要抗体或检测系统问题：使用次要抗体或检测系统的过程中，可能会引入非特异性抗体或其他的污染物，导致背景信号增强。

为了解决这些问题，可以考虑以下几个步骤：

确认细胞裂解充分：可以在裂解液中加入蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂等，以确保裂解液中的蛋白质不会被降解。

调整载体和表达条件：可以尝试改变载体、细胞株、诱导剂、感染剂等条件，以提高目标蛋白的表达量。

优化抗体选择和检测系统：可以尝试使用特异性更好的一抗和次抗，以及更清洁的检测系统，如使用新鲜的卡西酮-胰酶和高质量的试剂盒等。

优化免疫印迹实验条件：可以尝试优化电泳条件、转膜条件、封闭液和洗涤液的配方、检测时间和温度等，以降低背景信号和非特异性条带的出现。

总之，针对Western blot出现的背景干扰和非特异性条带问题，需要逐一排查可能的原因，并针对性地优化实验条件，才能得到准确的结果。

发光液配置时间过长同样会引起发光效果不好，背景脏或者漆黑一片。

二抗孵育的时间不宜过长，一般是室温下摇床孵育 1 到 2 小时，抗体孵育完成后要清洗干净，特别是二抗孵育完成后，否则可能导致显影结果出现高背景。

提高抗体的特异性，减少非特异性背景结合

可能是多克隆抗体，会有杂带。降低一下抗体浓度。