考研狗努力
做了很多边人精子蛋白wb,从最开始调整提取,然后bca测定,都是能跑出来的蛋白量。但是就很奇怪,每次内参都特别好,偶尔目的蛋白出现,但是重做就做不出来目的蛋白了。因为我的目的蛋白是25kd。所以我电泳是80v 120v 然后转膜是300mA 30min湿转。可是目的蛋白有时候有大多出不来。这可怎么办啊
申东熙老伯
可以试试增大蛋白上样量,转膜的时候降低电流,25算小条带,很容易转过。
毛利小五郎的徒弟
内参正常,目的蛋白不正常首先排除上样量不足的问题,其次还有可能是抗体失效。
huarenqiang5
考虑:1、蛋白质被降解掉了;2、抗体不能识别目的蛋白。