求助，人精子蛋白的wb
考研狗努力
做了很多边人精子蛋白wb，从最开始调整提取，然后bca测定，都是能跑出来的蛋白量。但是就很奇怪，每次内参都特别好，偶尔目的蛋白出现，但是重做就做不出来目的蛋白了。因为我的目的蛋白是25kd。所以我电泳是80v 120v 然后转膜是300mA 30min湿转。可是目的蛋白有时候有大多出不来。这可怎么办啊
4 个回答
dxy_wye9d2p
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请问你使用的是什么内参，我用β-tubulin当内参一直跑不出来。
申东熙老伯
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可以试试增大蛋白上样量，转膜的时候降低电流，25算小条带，很容易转过。
土井挞克树
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内参正常，目的蛋白不正常首先排除上样量不足的问题，其次还有可能是抗体失效。
huarenqiang5
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考虑：1、蛋白质被降解掉了；2、抗体不能识别目的蛋白。
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