脾脏样品提取蛋白或者RNA注意事项
实验是个狗
脾脏在处理的时候，破红的意义是啥？
在提取蛋白或者提RNA的之前，一定要破红吗，不破红会怎样？
或者在取脾脏样品的时候，需要提前进行灌流吗？
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3 个回答
huarenqiang5
有帮助
在冷冻条件下碾磨组织，再快速匀浆，能有效灭活核酶。但如果裂解液太粘稠 (因为核酸含量高的缘故)，PCI 抽提不能有效分层；加入更多裂解液可以解决此问题。多次PCI抽提可以去除更多残留的 DNA。如果加入醇后马上有白色沉淀形成提示有 DNA 污染。溶解后用酸性 PCI 再次抽提，可以去除 DNA 污染。
实验是个狗
谢谢。
所以按照您的说法，我可以理解为，如果操作迅速、低温进行，在提取蛋白和RNA的时候，脾脏不破红也是可以的，对吗？
还有一点疑问，破红和不破红对后续结果有什么影响吗？
土井挞克树
有帮助
破红是一定要的，要不然红细胞后续影响蛋白和rna提取，染色也有干扰
Dr_劉医生
有帮助
需要提前进行灌流，灌洗就是为了破红，破红就是为了减少红细胞凝血带来得脾脏组织生化功能的影响，蛋白会失去活性
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