dxy_dgr001
我想做一个跨膜蛋白和胞质蛋白的coip,验证它们在不同状态下的互作关系(它们的互作已经确定了,多有文献报道),但是我一直拉不到它们的互作,文献也没有特殊说明,感觉都是普通的ip实验。后来听说可能需要分离膜蛋白再做?请问怎么做?分离了膜蛋白怎么去把胞质的也一起分离呢?有具体的操作方法吗?
汤姆卜丽波
只需要分离膜蛋白,胞质蛋白不用分离出来,然后按照普通coip的流程做就可以了
dxy_dgr001
请问,胞质蛋白不分离怎么检测到ip的胞质蛋白呢
balalaLy
不用分离膜蛋白吧,有没有排除一下你的ip过程有没有哪步有问题?抗体、裂解液合不合适?
dxy_dgr001
具体怎么排出这些问题呢?我试了好几次了,但是一直做不出来,就是按照protocol来的
bamboopiggy
就是普通的coip就可以啊,如果你拉不下来,试试调整一下buffer中的去污剂浓度。别用sds,用triton或者是np40
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