求问如何做跨膜蛋白和胞质蛋白互作的coip？

dxy_dgr001

2022-08-30

我想做一个跨膜蛋白和胞质蛋白的coip，验证它们在不同状态下的互作关系（它们的互作已经确定了，多有文献报道），但是我一直拉不到它们的互作，文献也没有特殊说明，感觉都是普通的ip实验。后来听说可能需要分离膜蛋白再做？请问怎么做？分离了膜蛋白怎么去把胞质的也一起分离呢？有具体的操作方法吗？

汤姆卜丽波

2022-08-31

有帮助

只需要分离膜蛋白，胞质蛋白不用分离出来，然后按照普通coip的流程做就可以了

dxy_dgr001

2022-09-01

请问，胞质蛋白不分离怎么检测到ip的胞质蛋白呢

balalaLy

2022-08-30

有帮助

不用分离膜蛋白吧，有没有排除一下你的ip过程有没有哪步有问题？抗体、裂解液合不合适？

dxy_dgr001

2022-09-01

具体怎么排出这些问题呢？我试了好几次了，但是一直做不出来，就是按照protocol来的

bamboopiggy

2022-08-30

有帮助

就是普通的coip就可以啊，如果你拉不下来，试试调整一下buffer中的去污剂浓度。别用sds，用triton或者是np40