PI3K/AKT/mTOR信号通路 WB相关疑问?

彭花花hh

2022-07-20

跑了两种细胞的PI3K/AKT/mTOR相关蛋白，一种是22RV1，另外一种是Du145，两种细胞都做了同一个基因的敲低，目的是观察基因敲低是否影响这个通路。最近跑了一下这个通路，对于22RV1来说，以GAPDH作为内参，跑出来PI3K没有规律，AKT整齐，pAKT下调，mTOR下调，p-mTOR未显出条带。对于Du145来说，以GAPDH作为内参，跑出来PI3K没有规律，AKT整齐，pAKT未显出条带，mTOR下调，p-mTOR也下调。请问各位这是什么原因呢？能初步说明这个基因影响了这个通路吗?

3 个回答

天一湖医者

2022-07-20

有帮助

一个是PI3K/AKT/mTOR信号通路这个是存在磷酸化的，我觉得你在提蛋白的时候需要加磷酸化抑制剂。二个是你可以跑个18s看看，我觉得大概已经出来了有几个下调的，整体上抑制这个通路

Eason老歌迷

2022-07-20

有帮助

你可以做三个重复实验，一次实验并不能证明什么，我觉得预实验结果可行。

bamboopiggy

2022-07-20

有帮助

gapdh不适合做mtor信号通路的内参，你用tubulin或actin都可以。在你total akt齐的情况下，p-akt降低了，可以说明你的那个敲低影响mtor通路