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Wb‖条带粗怎么办?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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Wb还不错的小黄

看图

这是一位兄弟找的我,看的出来,很明显他跑的条带都有明显的特征,有点宽,不细,这是因为浓缩胶的比例没有调好,一般而言:浓缩胶厚度1cm左右比较好,不然蛋白不能集中一点浓缩,跑出来的条带比较宽,所以把浓缩胶高度加一加!

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3 个回答

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whilt-shirt

有帮助

有可能是上样量过高,建议减少上样量试试

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Eason老歌迷

有帮助

条带过粗,大概有几个原因。一个是电泳缓冲液用的次数过多,一般来说电泳缓冲液用过两次以后电泳的效果就会变差。二个是电泳的浓缩胶和分离胶缓冲液的PH没有调好或浓度没有调好。浓缩胶和分离胶胶浓度的变化和PH的变化让电泳样品压缩在一起。一般情况下浓缩胶缓冲液(Tris—HCl,pH6.8)、分离胶缓冲液(Tri s—HCl, pH8.8)。三个是提取的粗蛋白样品里面有杂质,细胞里面除了含有蛋白质还有核酸、多糖、纤维素等大分子,这些大分子浓度较高时会使样品黏连,造成条带跑的不够整齐。如果你是从胞浆里提取的粗蛋白,怀疑可能是核酸或多糖过多造成的样品黏连,建议12000转离心3min,去除底部杂质,取上清液跑试一试。

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bamboopiggy

有帮助

也可能是你的分离胶浓度不够,条带没法成一条线

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