请问背景颜色深，目的蛋白颜色浅是因为什么？

可能是你的封闭没有封闭好，也可能是目的蛋白表达量太少了，或者是你转膜没转好

1.不适合的封闭试剂封闭无效 2.洗涤不充分和洗涤液的量 3.胶片曝光过度 4.抗原或抗体的浓度太高

这种情况可能是因为TBST洗的时间有点短，没有把抗体完全洗干净，目的蛋白颜色浅有可能是因为转膜转的时间太长蛋白被转走了，可以试着缩短转膜时间，适当降低一抗浓度。

原因可能为：（1）一抗或/和二抗浓度太深。感觉你的一抗浓度太高了。（2）封闭时间短。（3）封闭液有问题。