免疫共沉淀实验，总是假阳性，该如何避免

免疫沉淀的假阳性一般來自洗过的免疫沉淀物中存在的某些蛋白质,这些污染物在完整细胞内不与目的蛋白相互结合,但在细胞裂解后可形成非生理条件的蛋白质与蛋白质的相互作用,也可能来自抗体与其他非目的蛋白的交叉反应,(这在做western很常见),或者非特异性反应.为了排除这种假阳性可采用几种方法:一是采用几种不同抗体.如用几种不同的cmyc抗体去IP,可增加结果的可信度,另外也可以采用对照抗体,如与你的抗体同源的另外一种无关抗体,这样任何同你的抗体和对照抗体都结合的即为非特异结合.还有可以加大清洗液的盐离子强度,(如加入1mol/L的NaCl)可以减少一些非特异结合.当然在跑胶前要再用PBS洗一下沉淀物,因为高盐条件下可影响电泳.

找好的抗体，注意buffer的裂解力和ph值

1、可能是抗体浓度高，降低抗体浓度；

2、抗体特异性不好，换抗体；

3、PCR污染，重新配置缓冲液。