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丁香通

WB跑不出来内参蛋白怎么办

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DrCx330

研一新生,跑了好几次,只有marker的显影,没有内参的

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4 个回答

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dxy_gwrp7ndq

有帮助

检查封闭剂浓度是否使用正确,一般3%脱脂奶即可;重新稀释一抗,并降低二抗使用浓度;也可以通过发光Western marker来监控整个wb过程的正确性,如果发光western marker信号同样背景很重,基本判断应该是抗体孵育、洗涤步骤有问题,试剂要逐一排查。

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府宅

有帮助

(1)准确估计蛋白浓度,保证10ug以上的上样量;(2)检查转膜海绵垫是否干净

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天一湖医者

有帮助

重新稀释一抗,并降低二抗使用浓度;也可以通过发光Western marker来监控整个wb过程的正确性,如果发光western marker信号同样背景很重,基本判断应该是抗体孵育、洗涤步骤有问题,试剂要逐一排查。

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bamboopiggy

有帮助

看看你是不是用的actin?一般actin的二抗是mouse,你是不是加错二抗了?

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