WB有杂条带是是怎么回事？

可能的原因：1.样品本身纯度不够；2.所用的溶剂（例如loading buffer）含有蛋白质污染；3.目的蛋白发生降解，杂带实际是目的蛋白的分解肽段

1. 抗体为多克隆，所以不止一个条带。看看说明书上面的结果是不是不止一个条带

2. 抗体不纯，混合了别的抗体

3. 电泳跑的不好，蛋白的位置有差异

可能是一抗的问题，也可能是蛋白被降解，蛋白酶将目标蛋白分解成若干个添加蛋白酶蛋白，而这些蛋白同样可以被一抗识别。

就是出现非特异性条带吧？可能是一抗特异性不强，与多种蛋白结合，更换一抗试试！

可能有以下原因：

1）目的蛋白有多个修饰位点，本身可以呈现多条带，建议查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小

2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作

3）杂蛋白多，建议处理目的蛋白

4）抗体特异性不强，建议使用特异性强的抗体

5）抗体孵育时间过久，建议减少抗体孵育时间

6）二抗与抗原有交叉反应，建议选择合适的封闭物

7）二聚体或多聚体存在，建议增加蛋白质变性过程及强度

8）底物显色与曝光时间过长，建议缩短显色及曝光的时间

一抗特异性是否不高，是否存在交叉反应；

◆ 二抗特异性是否有非特异性结合，可不加一抗验证；

◆ 一抗二抗浓度是否过高；

◆ 上样量是否过大；

◆ 封闭是否不足；

有可能是封闭不完全或者抗体浓度过高导致的

①目的蛋白存在多个修饰位点(磷酸化位点、糖基化位点等等)，本身可以出现多条带。查文献或生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，去除修蛋白饰后确定蛋白实际大小，这个需要一定的生物化学基础和生信分析能力。

②目的蛋白有其它剪切本，查阅文献或生物信息学分析其可能性。

③样本处理过程中目的蛋白发生降解，加入蛋白酶抑制剂；样本处理在冰上操作。

④上样量过高，过于敏感，适当减少上样量。

⑤一抗特异性不高，重新选择或制备高特异性的抗体。

⑥一抗不纯，纯化抗体。

⑦一抗或者二抗浓度偏高，适当降低抗体浓度。

抗体不特异，有非特异性条带，可以试试切走，如果切不走，趋势一致可以留着。不行就换个公司买抗体。

1、更换一抗，换单克隆的。

2、不换一抗，降低一抗稀释比，这样目的条带会变弱，不过杂带也会，有时候就可以去掉杂带了。

3、多封闭一下。

4、洗膜的时候多洗几次。