如何选择凝胶，以及层析柱？

要根据实验目的不同选择不同型号的凝胶和层析柱。

1.分离样品中的大分子物质和小分子物质，可选用Sephadex G-25和G-50，多采用2-30cm长的层析柱。

2.分离样品中一些分子量比较近似的物质，可选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶。需要100cm左右长的层析柱，且直径在1-5cm范围内最佳。

1.测定------分子量、PI
当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳PH。
2.选择------层析方法

若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法：

[一] 使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将 样品分成不同组份。

[二] 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。

[三] 体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。

层析柱的选择一般根据分离样品的种类而定。纯化蛋白质时，柱床体积应为样品体积的 25～100 倍；而除盐或除游离荧光素时，柱床体积约为样品体积的 4～10 倍。层析柱太短会影响分离效果，如太长会延长分离时间和过度稀释样品。层析柱的内径过细会发生「器壁效应」。层析柱的内径和高度有一定的比例，除盐柱应为 1:5～1:25，纯化蛋白质柱应为 1:20～1:100。

根据你的实验目的，你要纯化蛋白的大小，去公司的网站上，看说明书。