链霉亲和素融合蛋白的离子交换纯化相关问题

相关实验：蛋白质的表达、分离、纯化实验

丁香实验

2022-01-12

我把融合蛋白表达出来过离子交换层析以后，不管是流穿液还是所有对应的蛋白峰里面都没有我的目的蛋白，（但是做离子交换之前是有的）离子交换过程应该是没有什么问题的，我就是在想是不是这个标签对离子交换造成了影响？

26 个回答

是小杨同学

2022-01-20

有帮助

我觉得可能标签有点问题呢，可以换一个标签试一下，或者我觉得可以在蛋白与标签之间加一个酶切位点，在过离子交换之前把标签给切掉

lzy必有我师

2022-01-20

有帮助

1、标签有可能对这个蛋白质造成影响使得离子交换基团无法结合2、确定下做离子交换的介质是否合适，比如阴离子或者阳离子等。3、还有洗脱蛋白质的缓冲液PH等是否合适 4、试试亲和层次是否可行。

dxyhsx123

2022-01-20

有帮助

首先更换一个标签后在进行实验，进行验证。其次过柱的一些步骤和速度也要确认。

z流沙z

2022-01-19

有帮助

标签表达说不一定有没有影响，可以考虑换一个标签，另外标签在目的蛋白前后也有影响

内科小护士

2022-01-19

有帮助

如果是标签问题的话，那就换一个标签，或者在蛋白与标签之间加个酶切位点，过离子交换之前把的切掉。

JCorona

2022-01-19

有帮助

怀疑标签问题的话，可以试试换标签或者酶切标签后对比。排除标签的问题后，还可能是洗脱的问题。

医往情深丁香园

2022-01-19

有帮助

柱子的缓冲液还有清洗都要确保没问题，标签的话只要选择的合适的问题不大，不过也可以尝试换一个。

dxy_qkedgrg7

2022-01-19

有帮助

可能是标签有问题，可以换个其他的标签试一下

vae1476

2022-01-19

有帮助

应该不会是标签对离子交换产生的影响，实在怀疑可以做酶切，把酶切前后的，做个对比

dxy_f107rkjq

2022-01-19

有帮助

查一下相应蛋白的pI值，看看离子交换的梯度设置是否有问题。梯度完了用100%B或者A（根据选择的离子交换柱类型决定）冲洗，把样品都收集，看看是不是梯度设置问题

ZZDX-YILILI

2022-01-19

有帮助

1.确定下做离子交换的介质是否合适，比如阴离子或者阳离子等。还有洗脱蛋白质的缓冲液PH等是否合适。 2.标签有可能对这个蛋白质造成影响使得离子交换基团无法结合。 3.既然带了链酶亲和素标签，试试亲和层次是否可行。

dxy_bq4uxnd

2022-01-19

有帮助

标签一般不会对离子交换产生影响，如果之前做离子交换有，现在没有，建议利用酶把标签剪切掉。

一支肾上腺素

2022-01-19

有帮助

可能原因：超声的功率不对( 太大，蛋白炭化，太小，蛋白没有释放)解决方法：改变超声功率或超声前。

dxy_h7vcp8v3

2022-01-18

有帮助

检查离子交换前蛋白的浓度是否足够，如果太低则实验结束收集不到蛋白。建议，增加蛋白浓度；检查离子交换过程中buffer的ph值，是否中性，过程中没有使蛋白质变性。

dxywode

2022-01-18

有帮助

通常，两个基因之间的融合表达能更快地解决这些问题。在这种方式中，目的基因被引入某个高表达蛋白序列（fusion tag）的3’末端，比如大肠杆菌的一段序列，或者任一可在大肠杆菌中高度表达的基因，它提供良好表达所必需的信号，而表达出的融合蛋白的N末端含有由fusion tag编码的片段。fusion tag所编码的可能是整个功能蛋白或是其中的部分。比如6x His Tag、β-半乳糖苷酶融合蛋白和trpE融合蛋白、谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白以及硫氧还蛋白（Trx）融合蛋白等。