免疫共沉淀中珠子预吸附和IgG的问题

丁香实验

2021-12-15

1、在免疫共沉淀中，有一步是“每1ml总蛋白中加入100微升protein A琼脂糖珠（50%），4摄氏度摇晃10分钟（EP管插冰上，置水平摇床上），以除去非特异性杂蛋白，降低背景。再4°离心将上清转移到新的EP管”不是很明白这个非特异性蛋白是指什么？为什么不会把我的目的蛋白也吸附下来？并且离心后沉淀就是珠子拉下来的非特异性蛋白？上清还是所提的蛋白吗？

2、IgG是在什么时候加呢？目的是为了证明抗体的特异性吗？

1 个回答

丁香实验

2021-12-15

有帮助

你这边所说的非特异性蛋白大致可以理解为能够与protein A琼脂糖珠结合的蛋白；包括能与protein A结合蛋白和与agrose结合的蛋白。这样做毫无疑问会降低非特异结合，但是也要考虑到这一步的局限性：

1、是有可能把目的蛋白拉下来的，因为有些蛋白确实会跟proteinA结合，你恰好是做这这样的蛋白就有可能出现这个情况。

2、这种方法也没办法把所有非特异结合蛋白去除，所以也不用担心把你的目的蛋白拉下来。

IgG是你的抗体对照，是排除IgG非特异结合用的，在这一步之后，需要把离心上清均分两份，一份抗体，一份同种属的IgG。