实验OD值偏差问题，想知道哪里出错误了
丁香实验
我最近在做肝纤四项的试剂盒（竞争法），第一次做了HA的，试剂盒标曲最大点1.6左右，预实验的样本OD值也落在了标曲范围内。但是第二次做PⅢ的，整个板子OD值都大于3.6了，做了两次预实验都是这样，是什么原因，我实在是想不出是哪里操作出现了错误，补一下是MDL公司的试剂盒
9 个回答
颜渊溪桥
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首先前提是标准曲线做的没有问题，那么第二次的样品需要稀释后检测呢，是否样品中的本来前胶原含量就比较多。
sk1981521
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如果环境条件没有太大变化，整合板子都有OD值都很高是否是封闭不完全，板子包被，或样品稀释的问题
马小羊
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分享做elisa踩过的坑。一般我们不会照试剂盒说明的每次都配一个标曲，代价大。最初的标曲往往更准确，用超过保质期的标准品再去做标曲（用过超过半年的）偏差很大（od值显著偏小），而孔板受到的过期影响相对小，会出现样品od显著高于标曲od的情况。你首次标曲od最高仅1点几，是不是已经是放了很久的？一般最高可以达到3左右。 总之，1 新鲜标准品很重要；2 样品的稀释比例很重要（这个要预实验摸一下，例如我做过lps刺激后小鼠血清的il6，要稀释40倍才合适）；3 还要注意显色时间（保持一致，但说明书上的显色时间可能是偏长的）
Timy最爱柠檬水
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减少HRP孵育时间，建议染色过程中，不时观察，避免因为显色时间过长导致的值异常
莹啊免疫啊
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有可能板子脏了，有可能机器有问题，重启一遍试试，有可能手残试剂加错了，出不来结果原因真的还挺多，建议重做一次，做的时候每步记录，或者带个总做的人陪你做一次，可能有些你不知道的小细节
txs900416
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如果什么都不加本底都很高，可能是板子或者试剂污染。建议楼主把具体步骤写一下，我们才方便一步一步寻找问题
西柚味的芋圆
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做elisa的时候一定要考虑室温的影响啊，我曾经在冬天没有空调的情况下做，标曲的第一个孔都没有显示颜色，所以先排除一下温度是否时宜
dxy_0mxazdaw
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如果板子什么都没加，本底水平就很高，有可能是板子不干净，有污染。换个品牌的板子试一下。
peaceful13
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OD值的偏差有很多原因，包括试剂盒本身的板件差异，孔间差异，还有实验操作者的加样差异等都有可能引起偏差
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