请问如何得到纯化的目的蛋白？
honeywanghe
我做 HIS 标签的蛋白纯化，但是在过 NI 柱时出现各洗脱组份都检测不到蛋白条带的现象，即使是杂带也没有，试着加大洗脱液浓度、增加洗脱梯度，可是结果依然如此，后来检测柱子填料时发现目的蛋白还在填料里挂着，但就是洗脱不下来请问为什么检测不到杂蛋白呢？有什么方法可以解决这个问题，得到纯化的目的蛋白吗？
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1 个回答
detaibio
有帮助
一般来说，蛋白质表达纯化中常见的蛋白挂柱洗不下来的情况有以下几点：1.蛋白本身疏水性强，容易沉淀。2.溶液中离子强度有点高（降低溶液中的离子强度）3.溶液的PH值低（提高溶液的PH值）把蛋白弄下来的办法有，关健是看你后继想用蛋白做什么。
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