蛋白纯化时为什么检测不到杂蛋白？

建议重新装柱，使用新的填料尝试一下，一般300mM的咪唑基本可以把目的蛋白洗下来，前提是先用低浓度的咪唑洗去杂蛋白。还有就是最好在平衡柱子的时候在缓冲液里加入低浓度的咪唑，一般10mM即可，有利于蛋白挂柱。

重组蛋白纯化挂柱无法洗脱通常有以下几个原因： 1. 如果N-和C-同时带有组氨酸标签，会使洗脱的咪唑浓度增加 2.蛋白本身的PI过高也会增加洗脱难度 3.洗脱缓冲液的pH过高 4.纯化过程中蛋白变性沉淀

换咪唑，并确定缓冲液本身的成分和pH，可能你的某个试剂出现了问题

穿透里检测也没有蛋白条带吗？敢问你是用什么洗脱液洗脱的，一般都是用咪唑，0.5M的咪唑柱子上的所有的蛋白基本上都就洗下来了（如果咪唑实在洗不下来的话可以用EDTA洗）……至于你所说的纯化得到目的蛋白，这个咪唑的洗脱浓度还得靠你自己去摸索。你说的是蛋白洗不下来，建议你如果是用低于0.5M的咪唑洗的话，可以考虑0-0.5M的咪唑走个短点的线性梯度，可以大概看下目的蛋白洗脱的大致咪唑浓度。